进行蛋白质印迹实验时，必须优化一抗和二抗的量以减少背景并确保获得足够的信号。我们的促旋酶多克隆抗体和单克隆抗体已经过测试，可以减少进一步优化的需要。*

如果已加入纯蛋白，则应将一抗稀释 1:1,000；如果加入细胞裂解物，则应将一抗稀释 1:200。稀释液通常在洗涤缓冲液（1X TBS、0.1% Tween 20、1% 脱脂奶粉）中进行，每片印迹 20 ml，孵育 1 小时。用洗涤缓冲液洗涤以去除一抗后，将二抗以 1:5,000 的稀释度加入洗涤缓冲液中（多克隆抗体为抗兔抗体，单克隆抗体为抗鼠抗体）。

然后可以使用标准比色法或化学发光法对印迹进行可视化。

* 优化条件适用于 SDS-PAGE 微型凝胶，其中每条泳道中装有 1 µg 蛋白质样品（纯化蛋白质或细胞提取物），凝胶在印迹前在标准 SDS-PAGE 条件下运行（43 kDa 蛋白质 200 mA 运行 45 分钟或 90 kDa 或 97 kDa 蛋白质 200 mA 运行 60 分钟）。

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