ATCC细胞作为生命科学研究中广泛使用的细胞资源,其活性检测是确保实验成功的关键环节。准确评估ATCC细胞活性,能为科研人员提供细胞健康状况的重要信息,助力实验顺利开展。以下介绍几种常见的检测方法:
1.台盼蓝染色法
台盼蓝染色法是一种简单且常用的细胞活性检测方法。台盼蓝是一种阴离子型染料,不能透过活细胞完整的细胞膜,但可进入细胞膜受损的死细胞内,使其染成蓝色。具体操作时,将适量细胞悬液与一定比例的台盼蓝染液混合,在显微镜下观察。统计视野中未染色的活细胞和被染成蓝色的死细胞数量,通过计算活细胞占总细胞数的百分比,即可得出细胞活性。
2.MTT比色法
MTT比色法基于活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT(一种淡黄色的四氮唑盐)还原为不溶性的蓝紫色结晶甲瓒并沉积在细胞中,而死细胞无此功能。首先将细胞接种于96孔板中,培养一定时间后加入MTT溶液,继续孵育。随后弃去上清液,加入二甲基亚砜(DMSO)溶解甲瓒结晶,通过酶标仪测定各孔在特定波长下的吸光度值。吸光度值与活细胞数量呈正相关,由此可间接反映细胞活性。该方法灵敏度较高,能定量检测细胞活性,且可用于检测细胞增殖和细胞毒性等,但MTT还原产物甲瓒的溶解过程可能存在误差,且MTT本身有一定毒性,对细胞有潜在影响。
3.CCK-8法
CCK-8法是MTT法的改进版。CCK-8试剂中含有WST-8,在1-methoxy PMS作用下,能被活细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物。其操作过程与MTT法类似,将CCK-8试剂加入培养有细胞的孔板中,孵育一段时间后,用酶标仪测定吸光度。该方法相比MTT法,操作更简便,无需后续溶解步骤,且产物水溶性好,检测结果更稳定、准确,灵敏度更高,对细胞毒性也更小。不过,CCK-8试剂价格相对较高,成本上有一定限制。
4.流式细胞术
流式细胞术可对单个细胞进行多参数定量分析,用于检测细胞活性时,常结合荧光染料。例如使用碘化丙啶(PI)和钙黄绿素-AM双染法。钙黄绿素-AM可被活细胞内的酯酶水解,生成绿色荧光产物,而PI只能进入细胞膜受损的死细胞,使其发出红色荧光。通过流式细胞仪检测细胞的荧光强度,根据荧光信号区分活细胞、死细胞和凋亡细胞,并计算各类细胞的比例,从而精确评估细胞活性。该方法能同时获取大量细胞的信息,分析速度快、精度高,但设备昂贵,操作复杂,对技术人员要求较高。
每种ATCC细胞活性检测方法都有其优缺点和适用场景。科研人员需根据实验目的、细胞类型以及实验条件等因素,选择合适的检测方法,以准确评估ATCC细胞活性,为细胞研究工作奠定坚实基础。