CEPT是美国国立卫生研究院(NIH)开发的小分子混合物。由4种成分组成,并取其组成成分(Chroman 1、Emricasan、Polyamines、Trans-ISRIB)的开头字母命名为“CEPT"。研究表明,CEPT可防止人ES/iPS细胞(人多能干细胞:hPSCs)在细胞传代中的细胞应激和DNA损伤1)。与强效ROCK抑制剂Y-27632相似,可提高细胞传代和冻存时hPSCs的存活率。此外,与基于hPSCs的胚状体和类器官形成、单细胞克隆和基因编辑等干细胞研究中所用的现有培养方法相比,CEPT还可改善细胞存活率1,2,3)。FUJIFILM Wako已上线经无菌测试且无需制备的即用型CEPT Cocktail溶液。本产品为经过滤器灭菌的溶液,可直接添加至培养基使用。有助于再生医疗研究。1)Chen, Y. et al. : Nat. Methods, 18(5), 528 (2021).2)Tristan, C.A. et al. : Stem Cell Reports, 16, 3076 (2021).3)Tristan, C.A. et al. : Nat.Protoc., 18, 48 (2022).● 从DNA损伤等细胞应激中保护ES/iPS细胞,维持细胞结构与功能● 已通过内毒素测试以及支原体阴性检测的CultureSure系列以1/1,000的量添加本品至培养基,充分混合后使用。● 本产品为冻存品(-20°C)。为避免反复冻融,建议根据使用量分装冻存。● 溶解时可能会出现沉淀,并非产品质量问题,请直接使用。(沉淀于37°C下静置1~2 h可能会溶解,请避免反复冷冻和加热。)添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培养基,在37°C,5% CO2的条件下培养人iPS细胞201B7株(6孔板 1 well=9.5cm2)。培养经过16 h以后,更换不含CEPT或Y-27632的培养基,每2~3天更换培养基,继续培养。培养第8天时,确认细胞后,使用4%多聚甲醛固定细胞,ALP染色后,计数细胞集落。添加CEPT或Y-27632至含bFGF的StemSure® hPSC Δ培养基,在37°C,5% CO2的条件下培养人iPS细胞201B7株(96孔板)。培养经过16 h以后,更换不含CEPT或Y-27632的培养基,每2~3天更换培养基,继续培养。培养第13天时,确认细胞后,使用4%多聚甲醛固定细胞,ALP染色后,计数形成细胞集落的孔数与空孔数。通过所有孔数与细胞集落形成孔数之比,计算细胞集落形成率。细胞接种数少时,添加CEPT的组比添加Y-27632的组形成的细胞集落更多。【培养基】StemSure® hPSC培养基Δ+35 ng/mL bFGFRed:rBC2LCN-635(人iPS细胞膜染色)※ BC2LCN是一种对存在与人ES/iPS细胞的膜表面的糖链具有高亲和性的重组凝集素添加CEPT时与添加Y-27632时都未观察到细胞形态的差异,均可确认未分化维持状态。
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