重组细胞因子溶解注意事项

 

1．离心（Centrifuge）：高速离心 (10, 000 rpm) 20-30 秒，或低速离心 (2, 000 rpm) 5 分钟。

 

2．溶解（Reconstitution）：用去离子水或其它缓冲液（根据说明书要求进行选择）溶解至说明书要求的浓度 (一般为 0.1-1.0 mg/ml)。溶解时不可振荡，避免因化学键的断裂造成蛋白失活，可加入适当的溶剂轻摇并静置一段时间，待细胞因子全部溶解后使用。溶剂的选择： 

1）要求用去离子水溶解的产品，务必不可用盐溶液，避免过高的盐浓度造成蛋白不可逆的析出； 

2) 要求用盐溶液溶解的产品，请依照说明书上的浓度，同样也是为了避免过高的盐浓度。

 

3．分装和贮存（Aliquot and Storage）：蛋白溶解后可根据自己的实验需要进一步稀释成工作液，稀释可用RPMI 1640、DMEM 或PBS 等溶液。工作液在4℃可保存1 周，如需长期保存，最好在稀释液中加入10%的FCS（小?；蛱ヅＱ澹┗?.1 %的BSA（牛血清白蛋白）或5% HAS（人血清白蛋白）来稳定蛋白，然后需分装冻存于-20℃ （注意：不可冻存于-50℃以下）。分装时每管中工作液的体积最好是一次实验的用量，以实现每次实验用完一支工作液，避免反复冻融引起蛋白活性的降低。

 

细胞因子量极微，所以严谨的操作是必需的，任何不适当的溶解都会造成实验的失败，